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                                                斑馬魚行為實驗手冊丨條件性位置偏好(CPP)實驗

                                                日期:2022-12-01 00:54
                                                瀏覽次數:173
                                                摘要: CPP 是一種巴甫洛夫條件反射形式,用于研究與濫用**相關的獎勵效應。 成年斑馬魚習慣于將**暴露與特定(中性)環境刺激聯系起來。該實驗的目的是測量在特定環境中花費的時間,該環境以前與某種物質(**)相關,表明該化合物具有積極的增強特性。 實驗裝置 CPP 實驗裝置。A) 顯示了用于創建 4 個獨立隔間的分隔插入。B) 在實驗運行期間從 分析軟件界面捕獲的靜止圖像。如白色十字所示,在單獨的競技場中追蹤了四條魚。由于紅外跟蹤,實時跟蹤圖像上看不到刺激,因此在圖像上用彩色框表示刺激。 ...

                                                CPP 是一種巴甫洛夫條件反射形式,用于研究與濫用**相關的獎勵效應。


                                                成年斑馬魚習慣于將**暴露與特定(中性)環境刺激聯系起來。該實驗的目的是測量在特定環境中花費的時間,該環境以前與某種物質(**)相關,表明該化合物具有積極的增強特性。

                                                實驗裝置

                                                CPP 實驗裝置。A) 顯示了用于創建 4 個獨立隔間的分隔插入。B) 在實驗運行期間從 分析軟件界面捕獲的靜止圖像。如白色十字所示,在單獨的競技場中追蹤了四條魚。由于紅外跟蹤,實時跟蹤圖像上看不到刺激,因此在圖像上用彩色框表示刺激。



                                                FishTrack軟件用于分析斑馬魚的 CPP實驗。分隔插件用于創建四個獨立的測試隔間,用于在一個單元中跟蹤四條魚(見上圖 A)。刺激從測試箱下方的集成屏幕呈現。刺激可以由顏色、形狀或條紋組成,并且在呈現時可以選擇是否有偏見(見圖 B)。


                                                實驗程序

                                                CPP 范式在連續幾天發生的三個測試階段中進行。


                                                1. 重要的單一飼養:為了減少任何壓力影響,待測試的魚應在習慣化階段之前單獨飼養一周。

                                                2. 習慣化/自動塑造:在記錄 CPP 前兩天,還應將個別魚輕輕網住并放入 水箱中,讓其自由游泳 10-20 分鐘。這一步可以讓魚適應新的測試環境。

                                                3. 基線:在**個測試階段,記錄兩個不同環境的基線偏好。將魚放入單獨的測試缸中 20 分鐘,在此期間,允許每條魚探索其完整的測試場地,同時顯示兩種刺激。FishTrack系統可以自動跟蹤和測量在兩種刺激環境中花費的時間和行駛距離,以計算基線偏好。

                                                4. 計算百分比和基線刺激偏好。在基線的每個刺激附近花費的時間比例計算為:刺激 A 中的時間/(刺激 A 中的時間 + 刺激 B 中的時間)。

                                                5. 調節:在建立基線偏好后,連續三天,在存在*不喜歡的刺激(魚在基線期間花費*少時間的刺激)的情況下,將魚暴露于測試化合物或對照處理。魚被單獨放入水缸,優選刺激(魚在基線期間花費*多時間的刺激)預計 20 分鐘。然后將刺激改為*不喜歡的刺激,持續 20 分鐘,然后將測試化合物或鹽水注入罐中。

                                                6. 魚被放回原缸,測試缸被沖洗干凈。

                                                7. 探測:在 3 天的調節后,使用探測試驗確定偏好的任何變化。此步驟與基線記錄相同。將魚放入測試罐中 20 分鐘。兩種刺激同時呈現,魚在競技場中自由活動。測量在任一刺激環境中行進的時間和距離。

                                                8. 計算百分比和探測刺激偏好。位置偏好變化(CPP 變化評分)的計算方法是,從調節后**配對環境中的時間百分比中減去調節前**配對環境中花費的時間百分比,并以百分比表示。


                                                圖片

                                                數據處理


                                                圖片


                                                • 在此任務中通常測量的行為端點是在每個刺激附近花費的時間和行進的距離。FishTrack系統可以自動測量和處理這些行為端點。

                                                • 處理后的數據文件以 .csv 文件的形式編寫,例如 Excel進行訪問。CPP 協議中使用的典型變量包括行駛距離、每個變量花費的時間、計數器和總行駛距離。

                                                • 相對于對照,在**配對環境中花費的時間增加被視為測試化合物有回報的證據(計算為 CPP 變化分數)。環境刺激和測試化合物之間的學習關聯導致魚在該環境刺激中花費更多時間。

                                                • CPP 變化評分經常通過比較**條件劑量的單向 ANOVA 進行分析(參見圖像 D 和 E)。





                                                文獻參考

                                                Mathur, P., Lau, B., & Guo, S. (2011). Conditioned place preference behavior in zebrafish. Nature Protocols, 6(3), 338-345.


                                                Ninkovic, J., & Bally-Cuif, L. (2006). The zebrafish as a model system for assessing the reinforcing properties of drugs of abuse. Methods, 39(3), 262-274.


                                                Tzschentke, T. M.(2007). Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addict Biol, 12(3-4), 227-462. Doi: 10.1111/j.1369-1600.2007.00070.x



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